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Symmetry色譜柱的使用注意事項(xiàng)(含保護(hù)柱、樣品制備、pH、壓力等)

更新時(shí)間:2024-09-23      點(diǎn)擊次數(shù):476

為確保Symmetry色譜柱始終保持理想性能,請(qǐng)遵循以下原則:

 

a. 保護(hù)柱

在進(jìn)樣器和分析柱之間使用填料化學(xué)和顆粒大小都適合的沃特世保護(hù)柱。使用匹配的高性能保護(hù)柱,是保護(hù)主色譜柱而不影響或改變分析分離度的重要措施。保護(hù)柱需要根據(jù)樣品污染情況定期更換。當(dāng)系統(tǒng)背壓穩(wěn)步上升至設(shè)定壓力限值時(shí),通常表明需要更換保護(hù)柱。突然出現(xiàn)分叉峰也表明需要更換保護(hù)柱。

 

b. 樣品制備

1. 樣品中的雜質(zhì)往往會(huì)污染色譜柱。避免污染的方法之一是在分析之前使用填充有適合填料的Oasis™固相萃取小柱/色譜柱或Sep-Pak™小柱凈化樣品。

2. 為獲得理想峰形和靈敏度,優(yōu)先選用運(yùn)行分析時(shí)要用的流動(dòng)相或比它更弱的流動(dòng)相(有機(jī)改性劑含量更低)來(lái)制備樣品。

3. 如果樣品不是使用流動(dòng)相制備的,務(wù)必確保樣品、溶劑和流動(dòng)相可以混溶,以避免樣品和/或緩沖液產(chǎn)生沉淀。用0.2μm濾膜過(guò)濾樣品,去除顆粒物質(zhì)。如果用于溶解樣品的溶劑含有機(jī)改性劑(如乙腈、甲醇等),請(qǐng)確保濾膜材料不溶于該溶劑。請(qǐng)聯(lián)系濾膜生產(chǎn)商了解濾膜的溶劑兼容性。或者,可以考慮在8,000 rpm下離心樣品溶液20 min,然后將上清液

轉(zhuǎn)移至適當(dāng)?shù)臉悠菲恐小?/span>

 

c. pH值范圍

Symmetry色譜柱的推薦pH范圍為2~8。表2列出了常用的緩沖液和添加劑。此外,柱壽命將根據(jù)操作溫度、使用的緩沖液類型和濃度而有所不同。例如,在高溫下使用pH值為8的磷酸鹽緩沖液會(huì)縮短色譜柱壽命。

2:在pH 2~8范圍內(nèi)使用Symmetry色譜柱時(shí)的推薦緩沖液。

image.png

 

d. 溶劑

  為了保持理想的色譜柱性能,請(qǐng)使用優(yōu)質(zhì)的色譜級(jí)溶劑。所有水性緩沖液在使用前都必須過(guò)濾。推薦使用Pall Gelman Laboratory Acrodisc®過(guò)濾器。含有懸浮顆粒物的溶劑通常會(huì)堵塞色譜柱入口篩板的外表面,這會(huì)導(dǎo)致操作壓力增大,性能變差。使用前,請(qǐng)將所有溶劑徹底脫氣,避免泵和檢測(cè)器中形成氣泡。沃特世還建議使用在線脫氣裝置。運(yùn)行低壓梯度時(shí),溶劑脫氣尤其重要,因?yàn)樵谔荻冗\(yùn)行過(guò)程中混合水相溶劑與有機(jī)溶劑時(shí)可能形成氣泡。

 

e. 壓力

  Symmetry色譜柱可承受的壓力上限為6,000 psi400 bar40 Mpa),但為了盡可能延長(zhǎng)色譜柱和系統(tǒng)使用壽命,應(yīng)避免壓力超過(guò)4,000-5,000 psi

 

f. 溫度

  為了改善選擇性、降低溶劑粘度和提高傳質(zhì)速率,Symmetry色譜柱的推薦操作溫度范圍為20~45℃。但是,任何高于室溫的溫度都會(huì)對(duì)色譜柱壽命產(chǎn)生不良影響,色譜柱壽命還會(huì)根據(jù)pH和緩沖液條件而有所不同。

 

IV. 放大/縮小等度方法

  以下公式可在保持線性流速不變的前提下放大或縮小方法,并計(jì)算出新方法的上樣量:

如果色譜柱內(nèi)徑和長(zhǎng)度改變:

F2 = F1(r2/r1)2

進(jìn)樣體積1 = 進(jìn)樣體積2 (r2/r1)2(L2/L1)

其中: r = 色譜柱半徑(mm)

F = 流速(mL/min)

L = 色譜柱長(zhǎng)度(mm)

1 = 原始或參比色譜柱

2 = 新色譜柱

 

V. 故障排除

  保留時(shí)間、分離度或柱壓變化通常是色譜柱污染所致。請(qǐng)參閱“色譜柱清洗、再生和儲(chǔ)存"有關(guān)色譜柱故障排除問(wèn)題的信息,請(qǐng)參閱最新的waters目錄。


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